13,000 تومان

Adaptation of the GoldenBraid modular cloning system and creation of a toolkit for the expression of heterologous proteins in yeast mitochondria

فرمت ترجمه : word
رشته : کشاورزی
تعداد صفحات ترجمه : 24
سال انتشار مقاله : 2017

 

توضیحات

سازگاری سیستم کلونینگ مدولار GoldenBread و ایجاد یک ابزار برای بیان پروتئین های غیر مشابه در میتوكندری مخمر

چکیده:

سابقه و هدف: نیاز به توسعه روش های زیست شناسیِ مصنوعی و ابزاري جهت تسهیل مهندسی سریع و کارآمد مخمر ،متناسب با نیازهای الگو های خاص بیوتکنولوژی، احساس مي شود. در واقع، دستکاری پروتئین میتوکندری با توجه به ماهیت جداسازی شده، کاربرد بالقوه و جالبی دارد.

جهت انجام اکسل به لینک مربوطه مراجعه کنید .

جهت انجام اکسس به لینک مربوطه مراجعه کنید .

یکی از این مزایا ، این واقعیت است که تشكيل فلز پس از وارد شدن پروتئین به میتوکندری ،رخ می دهد که حاوی مخازن یون آهن، روی، مس و منگنز بوده و می تواند در واکنش های فلزکاری نوترکیب متالوپروتئین،مورد استفاده قرار بگيرد.

یکی دیگر از اين مزیت ها، این است که میتوكندری ها ،اُرگانِل مناسب برای میزبان پروتئین های حساس به اكسیژن هستند و به عنوان محیطی كوچكي با حجمِ اكسيژنِ كم درون ماتریكس در طول تنفس سلولی ،ایجاد می شوند.

يافته ها: در اين مقاله، سازگاری یک سیستم شبیه سازی مدولار GoldenBraid2.0 را برای ادغام واحدهای رونویسی در دو محل مختلف ِ ژنوم مخمر ،بررسي می کنیم. همچنین یک ابزار آماده سازی شامل پروتئین های مختلف، ترمیناتور ها و نشانگرهای انتخابي را ایجاد کرده که اين امر، باعث تسهیل ساخت ساختار های چند گانه و بازسازی مسیرهای بیوسنتز در مخمر ساکارومایسس سرویزیه می شود.

برای تسهیل بیان خاصی از پروتئین های نوترکیب در ماتریس میتوکندری ، از سیگنال های هدف گیری میتوکندری ،استفاده نموده و کارایی آنها را در شرایط رشد مختلف، آزمایش کردیم. مي توان گفت ادغام و بیان ژن های 14 باکتریایی نیتروژن (nif) که بعضی از آنها نیاز به کوفاکتورهای متالوکلستر خاصی دارند ،منجر به ثبات آنها شده،گرچه هنوز این پروتئین ها ، به شدت به اکسیژن حساس اند.

در یکی از این ژن ها، nifU، نشان داديم که تولید مطلوب این پروتئین از طریق استفاده از پیش سیکل هدفمند میتوکندری Su9 و گلیسرول به عنوان منبع کربن برای حفظ تنفس هوازی، به دست می آید.

نتيجه گيري: در اين مقاله، يك سيستم GoldenBraid2.0 اقتباس شده براي شكل گيري مدولار، ادغام ژنوم و بيان پروتئين هاي نوتركيب در مخمر ارائه مي كنيم. ابزاري را تهيه کرده ايم که حاوي مولکول هاي القاء کننده و سازنده، سيگنال هاي هدفمند ميتوکندري، ترميناتورها و نشانگرهاي انتخاب براي تضمين اثربخشيِ طراحي واحدهاي رونويسي نوتركيب است.

با تست کارایی سیستم با كمكِ پروتئین های نیتروژناز Nif و پیش تداخل های مختلف میتوکندری و شرایط رشد، راه را برای مطالعات آینده در مورد بیان پروتئین های غیر مشابه در میتوکندری های مخملی آماده کرده ایم.

مقدمه:

مخمر ساکارومایسس سرویزیه ،یک مخمر تک سلولی بوده که معمولا در کاربرد های زیست شناسی بیوتکنولوژی و مصنوعی استفاده می شود و توانایی رشد یا تنفس ، بسته به منبع کربن موجود را فراهم می آورد. استفاده از اين مخمر به عنوان یک عامل اصلي در علمِ بیوتکنولوژی بسيار اثر بخش است زیرا آن را به عنوان نقطه شروع برای پروژه های پیچیده مهندسی در یوکاریوت هایي که بسیاری از ویژگی های متابولیکی و سلولی آن را به اشتراک می گذارند، عمل می کند.

چند روش شبیه سازی مدولار برای مهندسی مخمر وجود دارد، مانند MoClo-YTK و GoldenGate مخمر yGG). با این حال، برای توسعه ابزار زیست شناسی جدید مصنوعی برای نیازهای پروژه های خاص نیاز است.

میتوکندری نقش بنیادی در تولید ATP از طریق تنفس سلولی و اجرای فعاليت هايِ بیوشیمیایی مهم برای سنتز اسید های چرب، اسیدهای آمینه و نوکلئوتید ها دارد. بسیاری از پروتئین ها حاوی کوفاکتور های متالوکلستر، برای فرآيند های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی ضروری هستند.

کوفاکتورهاي فلزی روی، آهن، مس و منگنز برای عملکرد طبیعی میتوکندری ،بسيار ارزشمند بوده و در ماتریس،از حجمِ نسبتا فراواني برخوردار هستند. یک استراتژی مهم برای بهره برداری از میتوکندری های مخمر، هدف گیری متالوپروتئین های نوترکیب در اندام های بدن است. پس از وارد شدن، این فلز و پروتئین ها می توانند به درستی پوشانده شده و سازنده های فلز مورد نیاز خود را با استفاده از قابلیت دسترسی فلزات خاص در ماتریس ترکیب کنند.

نقد و بررسی‌ها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “سازگاری سیستم کلونینگ مدولار GoldenBread و ایجاد یک ابزار برای بیان پروتئین های غیر مشابه”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *